氨基糖苷類抗生素（AGs）對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌具有抗菌效果，目前仍然是我國(guó)畜牧業(yè)、農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)常用的獸藥之一，也常被添加到飼料中促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育。然而，該類抗生素可能選擇性地?fù)p傷第 8 對(duì)腦神經(jīng)，導(dǎo)致前庭和耳蝸神經(jīng)損傷，且會(huì)導(dǎo)致腎近區(qū)小管損傷，出現(xiàn)血尿、蛋白尿、腎功能減退等癥狀。

       2020 年 7 月 1 日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第 194 號(hào)公告正式實(shí)施，要求停止生產(chǎn)、進(jìn)口、經(jīng)營(yíng)、使用除中藥外的所有促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑。因此，大家對(duì)分析檢測(cè)氨基糖苷類抗生素的關(guān)注度又達(dá)到了新高度。

       氨基糖苷類抗生素包括鏈霉素、雙氫鏈霉素、新霉素、卡那霉素、壯觀霉素、慶大霉素、 潮霉素、安普霉素等，此類化合物是由一個(gè)或多個(gè)氨基糖與氨基環(huán)己醇通過糖苷鍵連接而成的苷類化合物，具有極性強(qiáng)的特點(diǎn)，在 C18 色譜柱上通常很難保留。安捷倫開發(fā)了一種簡(jiǎn)便的 LC/MS/MS 分析方法，結(jié)合前處理過程，有效對(duì)氨基糖苷類化合物進(jìn)行準(zhǔn)確定性、定量分析。

 

       方案介紹

 

       1. 儀器與試劑

       Agilent 1290 Infinity 高效液相色譜系統(tǒng)， Agilent 6470 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)。甲酸、乙腈均為 色譜純。標(biāo)準(zhǔn)品：鏈霉素、雙氫鏈霉素、新霉素、壯觀霉素、慶大霉素、潮霉素B、安普霉素、卡那霉素，純度≥99.0%。Agilent Bond Elut Nexus WCX 和 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱。

 

       2. 前處理流程

 

       該方法評(píng)價(jià)了 Bond Elut Plexa PCX 和 Bond Elut Nexus WCX 對(duì) 8 種不同氨基糖苷類抗生素的吸附和保留情況，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)氨基糖苷類抗生素在兩種 SPE 柱中均具有很好的保留和洗脫性能，僅有鏈霉素和雙氫鏈霉素在 PCX 柱上保留太強(qiáng)較難洗脫，而壯觀霉素，潮霉素和卡那霉素在 WCX 柱上回收率較差，綜合考慮，此方法配合使用兩種 SPE 柱來(lái)完成對(duì) 8 種氨基糖苷類抗生素的分析。

 

       3. 線性范圍與檢測(cè)限

 

       8 種氨基糖苷類抗生素在濃度 10 ng/ml - 1 ug/ml 范圍內(nèi)線性相關(guān)，且線性相關(guān)系數(shù)均大于 0.99。在信噪比大于 1  和大于 3 時(shí)，測(cè)得 8 種氨基糖苷類抗生素在蜂蜜和蜂王漿中的檢測(cè)限分別為 5 - 10 µg/Kg 和 5 - 12.5 µg/Kg，定量限為 15 - 30 µg/Kg 和 15 - 35 µg/Kg，遠(yuǎn)低于各個(gè)國(guó)家對(duì)于食品中氨基糖苷類抗生素 MRLs 的要求。

 

       4. 結(jié)論

 

       本文建立了固相萃取結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定蜂蜜中 8 種氨基糖苷類抗生素殘留的分析方法。方法靈敏度滿足國(guó)際和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于食品中氨基糖苷類抗生素最大殘留限量的要求，方法中流動(dòng)相無(wú)需加入七氟丁酸酐離子對(duì)試劑，大大減少了離子對(duì)試劑對(duì)儀器的污染，有效解決了業(yè)內(nèi)關(guān)注的七氟丁酸酐污染儀器的大難題，適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)氨基糖苷類化合物分析。