基質(zhì)輔助激光解吸電離（MALDI）成像是DMPK研究的有力工具，它提供了藥物和代謝物的特異性測量，用于早期藥物篩選。timsTOF fleX是布魯克新型的MALDI成像質(zhì)譜系統(tǒng)，憑借ESI/MALDI雙重離子源和把高靈敏的LC-MS/MS PASEF測量與高分辨率MALDI成像相結(jié)合，完成從目標分子成像到非目標SpatialOMx研究。最新一代的timsTOF fleX使用創(chuàng)新的激光后電離MALDI-2技術(shù)獲得了較傳統(tǒng)MALDI 高1-3個數(shù)量級的靈敏度【1-2】。MALDI-2提高了離子產(chǎn)率并降低了離子抑制效應(yīng)。同時，MALDI-2還可對傳統(tǒng)MALDI不能電離的藥物和代謝物分子檢測和成像，如甾醇、他汀類、激素、維生素、聚糖等生物分子。這種實質(zhì)性的改進對于DMPK研究尤其重要。

 

       本應(yīng)用報告測試了MALDI-2對添加BI-YYY藥物標樣組織切片靈敏度的增強，并在大鼠用氯喹或BI-YYY給藥后，用MALDI-2成像分析，以確定靈敏度提高是否轉(zhuǎn)變?yōu)橹匾�的藥物定位信息。此外，還研究了氯喹代謝物分布，測試MALDI-2在檢出限上的提高。

   

       實驗使用大鼠新鮮肝臟和腎臟組織冷凍切片，切片安放在布魯克

 

       IntelliSlide™自定位玻片上。在切片表面點加咖啡因、氯喹、瑞舒伐他汀、BI-YYY和利血平混合物，施加2,5-二羥苯乙酮（DHAP）基質(zhì)，在1-100µM濃度范圍內(nèi)測試MALDI-2的靈敏度增加。隨后，大鼠在分別給予氯喹或 BI-YYY藥物2小時或24小時后取組織樣本，在配置了MALDI-2的timsTOF fleX質(zhì)譜系統(tǒng)上采集切片的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，像素尺寸為50µm。用SCiLS Lab軟件處理得到組織切片分子圖像，然后用MetaboScape® 2021軟件中的BioTransformer模塊預(yù)測了35個代謝產(chǎn)物[3]，對其中19個特別代謝物做了鑒定和強度測量，并計算了相對含量。

 

       標準小分子藥物被用來考察BI-YYY藥物電離效率的增加。比較系列濃度咖啡因、氯喹、瑞舒伐他汀、利血平和BI-YYY混合物的對照肝組織的MALDI和MALDI-2分子圖像，MALDI-2顯著提高了所有五種受試化合物的靈敏度，其中新的藥物BI-YYY的峰值強度使用MALDI-2提高了300倍。

 

       動物給藥后的MALDI-2成像顯示腎臟和肝臟中氯喹峰強度分別高出6倍和5倍，BI-YYY的峰強度增加了8.5倍和6倍。所選氯喹代謝物的圖像。可以看出，傳統(tǒng)MALDI對大多數(shù)代謝物的信號微弱的，而MALDI-2對許多化合物的響應(yīng)顯著提高，獲得了以前未被檢測到的代謝物的組織分布信息和更低的目標化合物的檢測限，這對DMPK研究都至關(guān)重要。

 

       MALDI-2激光誘導后電離是提高藥物成像靈敏度的有力工具，可對更多類型的化合物分子測量，得到BI-YYY或氯喹在體內(nèi)代謝和組織分布更多的信息。