瑞士萬通:離子色譜——在高效液相色譜的觸角之外。
高效液相色譜(HPLC)和離子色譜(IC)都是制藥、食品和環(huán)境等領(lǐng)域分析實驗室的常用設(shè)備,尤其是HPLC,在一家單位中有幾十乃至幾百臺HPLC同時運轉(zhuǎn)的情形并不少見,IC的數(shù)量雖然比HPLC少一些,但是也經(jīng)?梢砸姷。那么二者究竟有什么異同呢?下面我們一起來看一下吧!
什么是液相色譜?
液相色譜是指對樣品中的化合物進行分離并定量的一類物理化學技術(shù),通常由攜帶樣品的流動相和對樣品中化合物起到分離作用的固定相組成,F(xiàn)代液相色譜的固定相通常為粒徑在μm范圍的小顆粒,并填充到空心柱中,以分離柱的形式呈現(xiàn)。
樣品中化合物的分離取決于各組分與固定相結(jié)合能力的強弱。與固定相結(jié)合較強的,在分離柱中有更好的保留,不容易被流動相沖出;而與固定相結(jié)合較弱的組分,則在固定相中保留較差,流動相略微沖洗即可流出。這樣利用待分離組分與固定相結(jié)合能力的強弱,便可達到對樣品中化合物進行分離的目的,然后使用不同的檢測技術(shù)便可對不同的化合物定量。
離子色譜(IC)和高效液相色譜(HPLC)是最常用的兩種液相色譜技術(shù)。對于各個行業(yè)來說,從原材料檢驗到添加劑分析,再到最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制,它們都是必不可少的工具。
HPLC和IC的不同之處
1分離機理不同
在HPLC中,待測物質(zhì)的分離是基于該物質(zhì)與固定相的親水相互作用(正相HPLC)或疏水相互作用(反相HPLC),因此HPLC適用于極性和非極性有機化合物的分離。其中反相HPLC的應(yīng)用較為普遍,一般使用有機溶劑作為流動相。在IC中最常用的分離機制是離子交換,根據(jù)待測物的不同,還可以使用離子排斥和離子對兩種分離機理進行分離。在使用離子交換機理進行分離時,待測離子與固定相表面的離子交換基團發(fā)生交換,屬于化學反應(yīng),而不像HPLC,分離僅僅依靠物理吸附作用。而且,當離子色譜選擇合適的色譜柱時,也可以分離非離子化合物和極性化合物。
2流動相不同
HPLC的分離是使用有機溶劑作為流動相進行的,通常使用梯度洗脫來獲得弱保留分析物的良好分離度并加快強保留分析物的洗脫。為了與流動相混溶,通常也將樣品溶解在有機溶劑中。與HPLC相反,離子色譜法中的分離在水相中進行,典型的流動相一般由超純水和溶解的鹽或酸組成。絕大多數(shù)IC分離可通過等度洗脫進行,僅有少數(shù)分離需要梯度洗脫。
3分離柱不同
IC和HPLC中的分離柱均采用基于表面改性的顆粒作為固定相,待分離的分析物與固定相發(fā)生相互作用,實現(xiàn)分離。但是二者固定相的表面官能化有所不同:IC中的固定相以陰離子或陽離子交換基團為特征,而HPLC則依賴于非極性(反相HPLC)或極性(正相HPLC)官能團。此外IC與HPLC的分離柱所使用的外殼也有所不同,HPLC分離柱一般使用不銹鋼外殼,而由于IC的流動相容易與不銹鋼發(fā)生腐蝕反應(yīng),所以IC分離柱一般采用惰性的PEEK外殼。
4檢測器不同
HPLC中使用的主要檢測器是UV檢測器。UV檢測器能夠檢測具有紫外光吸收的物質(zhì):從分離柱流出的流動相會受到紫外線的照射,根據(jù)在不含樣品的流動相和含有樣品的流動相之間測得的吸光度差異,便可以對分析物進行定量。而IC則主要采用電導檢測器,通過測量流動相電導率的變化來檢測和定量分析物,靈敏度較高。
5抑制器不同
離子色譜中樣品的分離需要使用可以導電的鹽或酸流動相,這樣造成電導檢測器檢測到的信號背景值很高,嚴重降低檢測靈敏度,此時需要使用抑制器來抑制背景信號值,詳細內(nèi)容請參見離子色譜抑制還是非抑制,可能沒你想的那么簡單——陰離子篇和離子色譜抑制還是非抑制,可能沒你想的那么簡單——陽離子篇。而HPLC則不存在這個問題,因此也不需要抑制器。